معرفی محصول

نام محصول	گربه شماره	مشخصات
کیت RNA گیاهی برای پلی ساکاریدها و پلی فنولیک ها	G3641-50T	50T

توضیحات محصول/معرفی

این کیت می تواند RNA را از نمونه های مختلف بافت گیاهی (مانند برگ، دانه، میوه و...) غنی از پلی ساکاریدها و پلی فنل ها با استفاده از سیستم بافر لیز ترکیبی با روش خالص سازی غشایی سیلیکاژل استخراج کند. این کیت می تواند به طور موثر پلی ساکاریدها، پلی فنل ها، پروتئین ها، قطعات سلولی و سایر ناخالصی های موجود در نمونه های بافت گیاهی را حذف کند و می تواند تا ده ها میکروگرم RNA با خلوص بالا و یکپارچگی بالا را از 20-200 میلی گرم نمونه بافت گیاهی در یک واحد خالص کند. ساعت هیچ معرف آلی مانند فنل و کلروفرم مورد نیاز نیست. RNA با خلوص بالا استخراج شده می تواند به طور مستقیم در آزمایش های مختلف زیست شناسی مولکولی مانند هیبریداسیون شمالی، هیبریداسیون نقطه ای، خالص سازی mRNA، ترجمه آزمایشگاهی، RT-PCR، RT-qPCR، ساخت کتابخانه cDNA و غیره استفاده شود.

شرایط نگهداری و جابجایی

محلول DNase، DTT در یخ مرطوب منتقل می شود و در درجه -20 ذخیره می شود. معرف های باقی مانده در دمای اتاق حمل و نگهداری می شوند. تاریخ انقضا 12 ماه است.

محتویات محصول

شماره کامپوننت	جزء	G3641-50T
G3641-1	بافر PRL1	30 میلی لیتر
G3641-2	بافر PRL2	8 میلی لیتر
G3641-3	بافر PRL3	30 میلی لیتر
G3641-4	بافر RWA	18 میلی لیتر
G3641-5	بافر RWB	20 میلی لیتر
G3641-6	راه حل DTT	1.2 میلی لیتر
G3641-7	DNase	250 μL
G3641-8	بافر 10×DNase	500 μL
G3641-9	آب بدون هسته	10 میلی لیتر
G3641-10	ستون‌های چرخشی RNA (با لوله‌های مجموعه)	50 ست
دستی		یک کپی

قبل از شروع (لطفا با دقت بخوانید)

1. اگر بافر PRL1 رسوب کرد، لطفاً آن را در دمای 37 درجه حرارت دهید و هنگامی که به دمای اتاق بازگردانده شد از آن استفاده کنید.

2. قبل از استفاده، لطفاً محلول DTT را به بافر PRL3 اضافه کنید تا غلظت نهایی 4٪ شود، یعنی 40 میکرولیتر محلول DTT را به 1 میلی لیتر بافر PRL3 اضافه کنید. این لیز به بهترین وجه تازه تهیه می شود، بافر PRL3 اضافه شده به محلول DTT را می توان در دمای 4 درجه به مدت یک ماه نگهداری کرد.

3. قبل از استفاده، لطفاً 12 میلی لیتر اتانول مطلق به بافر RWA و 80 میلی لیتر اتانول مطلق به بافر RWB اضافه کنید.

4. هنگام آسیاب کردن با آسیاب، آسیاب را از قبل سرد کنید.

پروتکل / رویه های سنجش

1. لیز بافت های گیاهی:

الف برای برگ های گیاه، حجم نمونه برداری توصیه شده {{0}} میلی گرم است. بافت گیاهی تازه یا منجمد شده را به یک لوله آسیاب 2.0 میلی لیتری بدون هسته (HT{4}}M توصیه شده) حاوی 3-4 3 میلی متر دانه های زیرکونیا (G0203-150 G توصیه شده) و از قبل خنک شده با مایع منتقل کنید. نیتروژن لوله سنگ زنی را روی آسیاب قرار دهید (KZ-5F-3 توصیه شده) (قبل از قرار دادن لوله آسیاب، آداپتور را به سرعت در نیتروژن مایع خنک کنید. روش آسیاب توصیه شده: فرکانس را روی 60 هرتز تنظیم کنید، دما را روی 4 درجه هر بار 30 ثانیه آسیاب کنید و 4 بار با فاصله 5 ثانیه بین هر آسیاب این کار را تکرار کنید و آسیاب کنید تا کاملا به طور کامل پودر شده (اگر بافت به طور کامل به پودر تبدیل نشود، بر عملکرد و کیفیت RNA تأثیر می گذارد. زمان آسیاب را می توان تا زمانی که بافت کاملاً آسیاب شود افزایش داد). هنگامی که آسیاب کامل شد، 500 میکرولیتر بافر PRL1 را به لوله آسیاب اضافه کنید، محتویات را وارونه مخلوط کنید و در دمای 56 درجه به مدت 15 دقیقه انکوبه کنید، هر 5 دقیقه وارونه مخلوط کنید.

ب برای دانه های گیاهی، حجم نمونه توصیه شده {{0}} میلی گرم و برای میوه ها 100-200 میلی گرم است. 500 میکرولیتر بافر PRL1 را از قبل به یک لوله سنگ زنی بدون هسته 2.0 میلی لیتری (توصیه شده HT-200-M) اضافه کنید و سپس دانه های فولادی 3-4 4 میلی متری اضافه کنید (توصیه شده G{{9). }}G). بافت گیاهی تازه یا منجمد شده را به لوله آسیاب 2.0 میلی لیتری بدون نوکلئاز منتقل کنید. لوله آسیاب را روی آسیاب قرار دهید (KZ-5F-3 پیشنهادی D) (روش آسیاب توصیه شده: فرکانس را روی 70 هرتز، درجه حرارت را روی 4 درجه تنظیم کنید، هر بار 30 ثانیه آسیاب کنید، فرآیند را تکرار کنید. 20-30 بار با فاصله 5 ثانیه ای بین هر آسیاب) و آنقدر آسیاب کنید تا کاملاً یکدست شود (اگر بافت کاملاً آسیاب نشده باشد. برای همگن شدن، بر عملکرد و کیفیت RNA تأثیر می گذارد. پس از اتمام آسیاب، در دمای 56 درجه به مدت 15 دقیقه انکوبه کنید و هر 5 دقیقه به صورت وارونه مخلوط کنید.

2. سانتریفیوژ در 12، 000 دور در دقیقه به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق، مایع رویی را به یک لوله سانتریفیوژ 1.5 میلی لیتری جدید منتقل کنید. 1/5 حجم مایع رویی بافر PRL2 را کاملاً وارونه اضافه کنید و خوب مخلوط کنید.

3. سانتریفیوژ در 12، 000 دور در دقیقه به مدت 5 دقیقه در 4 درجه، مایع رویی را به یک لوله سانتریفیوژ 2.{6}} میلی لیتری جدید منتقل کنید. 500 میکرولیتر بافر PRL3 را به مایع رویی اضافه کنید (مطمئن شوید که محلول DTT را قبل از استفاده اضافه کرده اید)، کاملا وارونه و خوب مخلوط کنید.

4. 1/2 حجم ایزوپروپانول را به مخلوط مرحله قبل کاملاً وارونه اضافه کنید و خوب مخلوط کنید.

5. مخلوط را به ستون اسپین RNA منتقل کنید. هر افزودنی از 600 میکرولیتر تجاوز نمی کند، اگر بیشتر شود، می توان آن را به صورت دسته ای اضافه کرد.

6. با سرعت 12، 000 دور در دقیقه به مدت 1 دقیقه در دمای اتاق سانتریفیوژ کرده و فیلتر را دور بریزید. ستون چرخش RNA را دوباره در لوله مجموعه قرار دهید.

7. 500 میکرولیتر بافر RWA را به ستون اسپین RNA اضافه کنید و با سرعت 12{3}} دور در دقیقه به مدت 1 دقیقه در دمای اتاق سانتریفیوژ کنید، سپس فیلتر را دور بریزید.

8. 600 میکرولیتر بافر RWB را به ستون اسپین RNA اضافه کنید (لطفاً بافر RWB را در امتداد دیواره لوله اضافه کنید تا نمک باقیمانده روی دیواره لوله پاک شود)، و با سرعت 12،{3}} دور در دقیقه به مدت 1 دقیقه در دمای اتاق سانتریفیوژ کنید. سپس فیلتر را دور بریزید.

9. هضم DNase:

الف) تهیه محلول واکنش DNase: 5 میکرولیتر 10 × DNase بافر، 5 میکرولیتر DNase، 40 میکرولیتر آب بدون نوکلئاز را در یک لوله سانتریفیوژ جدید 1.5 میلی لیتری بدون نوکلئاز مخلوط کنید.

ب) 50 میکرولیتر محلول واکنش DNase را به مرکز ستون اسپین RNA اضافه کنید و در دمای اتاق به مدت 15 دقیقه قرار دهید.

ج) 500 میکرولیتر بافر RWB را به ستون اسپین RNA اضافه کنید و با سرعت 12{2}} دور در دقیقه به مدت 30 ثانیه در دمای اتاق سانتریفیوژ کنید، سپس فیلتر را دور بریزید. ستون RNA Spin را دوباره در لوله جمع آوری قرار دهید.

10. مرحله 8 را تکرار کنید.

11. RNA Spin Column را در لوله جمع آوری قرار دهید، با سرعت 12، 000 دور در دقیقه به مدت 2 دقیقه در دمای اتاق سانتریفیوژ کنید تا مایع باقیمانده خارج شود.

12. ستون چرخش RNA را به یک لوله سانتریفیوژ جدید 1.5 میلی لیتری بدون نوکلئاز منتقل کنید، به مدت 3 تا 5 دقیقه در دمای اتاق قرار دهید، به طوری که اتانول باقی مانده از ستون اسپین RNA کاملاً تبخیر شود.

13. 50-100 میکرولیتر آب بدون هسته را به مرکز ستون اسپین RNA اضافه کنید، به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق قرار دهید. برای جمع آوری RNA به مدت 2 دقیقه در دمای اتاق با سرعت 12، {5}} دور در دقیقه سانتریفیوژ کنید. برای به دست آوردن غلظت بالاتر RNA، می‌توانید اولین ماده شوینده را دوباره به ستون چرخش RNA اضافه کنید، سپس به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق قرار دهید و با سرعت 12،{9}} دور در دقیقه به مدت ۲ دقیقه در دمای اتاق سانتریفیوژ کنید تا دوباره RNA جمع‌آوری شود. .

توجه داشته باشید

1. لطفاً هنگام عمل از کت آزمایشگاه و دستکش یکبار مصرف استفاده کنید.

2. از محصولات و نکات پلاستیکی بدون RNase برای جلوگیری از آلودگی متقابل استفاده کنید.

3. از میز تست و تجهیزات الکتروفورز مخصوص برای عملیات RNA استفاده کنید و در حین کار از ماسک استفاده کنید تا از آلودگی RNase ظروف و معرف های مورد استفاده جلوگیری کنید.

4. در صورت جمع آوری نمونه های گیاهی در خارج از آزمایشگاه، نمونه ها باید در نیتروژن مایع قرار داده شوند تا بر عملکرد و کیفیت RNA تأثیری نگذارند.

5. برای نمونه هایی که محتوای آب بیشتری دارند، می توان حجم نمونه اولیه را به طور مناسب افزایش داد.

برنامه ریزی کنید

بازده RNA استخراج شده از انواع نمونه های گیاهی و قارچی توسط این کیت در جدول زیر نشان داده شده است. عملکرد RNA مربوط به گونه های گیاهی، اندام ها، تازگی و وضعیت رشد است. جدول زیر فقط برای مرجع است.

نوع نمونه	نام نمونه	بازده RNA
برگ	گوسیپیوم هیرسوتوم	40-45 ug/80 mg
	رزا چیننسیس	50-60 ug/50 mg
	کاج	5-8 ug/50 mg
	Bryophyllum pinnatum	5-8 ug/150 mg
بذر	Arachis hypogaea	15-20 ug/50 mg
	Triticum aestivum	5-8 ug/50 mg
	براسیکا ناپوس	20-25 ug/20 mg
	گوسیپیوم هیرسوتوم	20-25 ug/20 mg
میوه	Lycopersicon esculentum	20-25 ug/150 mg
غده	Solanum tuberosum	10-13 ug/200 mg