کیت استخراج DNA ژنومیک FFPE

 

نام محصول	گربه شماره	مشخصات
کیت استخراج DNA ژنومیک FFPE	G3635-50T	50 T

 

 

این کیت برای استخراج DNA ژنومی بافت فرمالین ثابت و پارافین جاسازی شده (FFPE)، با استفاده از معرف موم زدایی ویژه، بدون زایلن و سایر حلال های آلی، ایمن و غیر سمی، می تواند به طور موثر پارافین را حذف کرده و نمونه های بافت را آزاد کند. این کیت می تواند به سرعت و به طور موثر DNA ژنومی را از بافت های تعبیه شده در پارافین با استفاده از بافر لیز ویژه همراه با روش ستون سانتریفیوژ استخراج کند. فرآیند استخراج را می توان در عرض 1 ساعت تکمیل کرد و DNA دارای عملکرد بالا، خلوص و یکپارچگی بالا است، بنابراین برای انواع آزمایشات زیست شناسی مولکولی پایین دستی، مانند PCR، Real-Time PCR، ژنوتیپ SNP و سایر آزمایش های زیست شناسی مولکولی مناسب است. .

 

 

RNase A و Proteinase K با یخ مرطوب ارسال می شوند و در درجه -20 ذخیره می شوند. سایر معرف ها حمل و در دمای اتاق ذخیره می شوند. اعتبار به مدت 12 ماه

 

 

شماره کامپوننت	جزء	G3635-50T
G3635-1	بافر DP	30 میلی لیتر
G3635-2	بافر GL	10 میلی لیتر
G3635-3	پروتئیناز K	1 میلی لیتر
G3635-4	RNase A	500 μL
G3635-5	بافر گیگابایت	10 میلی لیتر
G3635-6	بافر GP	9 میلی لیتر (21 میلی لیتر اتانول بدون آب قبل از استفاده لازم است)
G3635-7	بافر PW	24 میلی لیتر (56 میلی لیتر اتانول بدون آب قبل از استفاده لازم است)
G3635-8	بافر TE	10 میلی لیتر
G3635-9	ستون های چرخش DNA	50
دستی		یک کپی

 

 

1. حمام های آب یا فلزی را در دمای 80 درجه، 56 درجه و 90 درجه از قبل آماده کنید.

2. اگر Buffer GL و Buffer GB رسوب کرد، لطفاً در دمای 65 درجه حرارت دهید تا حل شود و پس از بازگشت به دمای اتاق از آن استفاده کنید.

3. لطفاً قبل از اولین استفاده، 21 میلی لیتر اتانول بی آب به بافر GP و 56 میلی لیتر اتانول بی آب به بافر PW اضافه کنید، آن را کاملاً مخلوط کرده و سپس استفاده کنید.

 

 

1. آماده سازی نمونه ها:

الف بخش های پارافین: 5 تا 8 بخش پارافین (اندازه 1×1 سانتی متر مربع) را با یک اسکالپل استریل خراش دهید و قطعات بافت را جمع آوری کنید و در یک لوله سانتریفیوژ 1.5 میلی لیتری قرار دهید.

ب بلوک های پارافینی: نمونه بافت حدود 30 میلی گرم را با چاقوی جراحی استریل خراش دهید، پارافین اضافی را تا حد امکان خارج کنید و نمونه را برش دهید.

ج بافت نمونه آغشته به فرمالین: مایع را روی سطح نمونه با کاغذ صافی خشک کنید، حدود 30 میلی گرم نمونه بردارید، آن را برش دهید و در لوله سانتریفیوژ 1.5 میلی لیتری قرار دهید، 500 میکرولیتر بافر PBS (pH 7.4) اضافه کنید، نوسان گرداب به مدت 10 ثانیه سپس با سرعت 12،{8}} دور در دقیقه به مدت 1 دقیقه در دمای اتاق سانتریفیوژ کنید، مایع رویی را دور بریزید. 3 بار تکرار کنید

2. نمونه را به یک لوله سانتریفیوژ 1.5 میلی لیتری منتقل کنید، 500 میکرولیتر بافر DP اضافه کنید، در دمای 80 درجه به مدت 3 دقیقه و نوسان گردابی را به مدت 10 ثانیه در حالی که نمونه داغ است، انکوبه کنید.

3. 200 میکرولیتر بافر GL را به لوله سانتریفیوژ اضافه کنید، کاملاً با ورتکس مخلوط کنید، با سرعت 12،{3}} دور در دقیقه به مدت 1 دقیقه در دمای اتاق سانتریفیوژ کنید و دو لایه محلول تشکیل دهید (لایه بالایی فاز روغن و لایه پایینی است. فاز آب).

4. 20 میکرولیتر پروتئیناز K و 10 میکرولیتر RNase A را به فاز آبی پایینی اضافه کنید، به آرامی با پیپت مخلوط کنید (سعی کنید لایه لایه را از بین نبرید)، در دمای 56 درجه به مدت 20 دقیقه انکوبه کنید.

5. سپس لوله سانتریفیوژ را به یک بلوک حرارتی 90 درجه منتقل کنید، به مدت 10 دقیقه انکوبه کنید (اگر تعداد بلوک های بافت بیشتری وجود دارد که به طور کامل هضم نشده اند، زمان انکوباسیون را می توان به طور مناسب تا 20 دقیقه افزایش داد)، و تا دمای اتاق خنک شود.

6. 200 میکرولیتر بافر GB و 200 میکرولیتر اتانول بی آب در مرحله قبل به نمونه اضافه کنید و با نوسان گردابی خوب مخلوط کنید.

7. سانتریفیوژ 12، 000 دور در دقیقه به مدت 1 دقیقه، و تشکیل دو لایه محلول (لایه فوقانی فاز روغن، لایه پایین فاز آب).

8. محلول آبی را از لایه زیرین در ستون اسپین DNA خارج کنید (محلول فاز روغن بالایی و سایر ناخالصی ها را دریافت نکنید). سانتریفیوژ را با سرعت 12، 000 دور در دقیقه به مدت 2 دقیقه در دمای اتاق انجام دهید و فیلتر را دور بریزید.

9. 500 میکرولیتر بافر GP را به ستون اسپین DNA اضافه کنید، با سرعت 12،{3}} دور در دقیقه به مدت 1 دقیقه در دمای اتاق سانتریفیوژ کنید، سپس فیلتر را دور بریزید.

10. 600 میکرولیتر بافر PW را به ستون چرخش DNA اضافه کنید (لطفاً بافر PW را در امتداد دیواره لوله اضافه کنید تا به شستشوی نمک باقیمانده روی دیواره لوله کمک کند)، سانتریفیوژ کنید با سرعت 12 و {3}} دور در دقیقه به مدت 1 دقیقه در دمای اتاق، و فیلتر را دور بریزید

11. مرحله 10 را تکرار کنید.

12. ستون چرخش DNA را روی لوله جمع آوری قرار دهید، سانتریفیوژ کنید با سرعت 12، {2}} دور در دقیقه به مدت 2 دقیقه. ستون چرخش را به یک لوله سانتریفیوژ 1.5 میلی لیتری بدون هسته جدید منتقل کنید.

13. درب ستون چرخش DNA را باز کنید، آن را به مدت 3 تا 5 دقیقه در دمای اتاق بگذارید تا اتانول کاملاً تبخیر شود.

14. 50 ~ 100 میکرولیتر بافر TE یا آب بدون نوکلئاز را که از قبل در دمای 65 درجه گرم شده است به مرکز غشاء ستون DNA Spin اضافه کنید، به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق قرار دهید. برای جمع آوری DNA به مدت 2 دقیقه با سرعت 12، {7}} دور در دقیقه سانتریفیوژ کنید. برای به دست آوردن غلظت بالاتر DNA، می‌توانید اولین ماده شوینده را دوباره به ستون چرخش DNA اضافه کنید، سپس به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق قرار دهید و با سرعت 12،{11}} دور در دقیقه به مدت ۲ دقیقه سانتریفیوژ کنید تا دوباره DNA شستشو داده شود.

 

 

1. لطفا قبل از استفاده دفترچه راهنمای محصول را به دقت بخوانید.

2. بازده و یکپارچگی DNA استخراج شده توسط این کیت به نوع نمونه، زمان ثابت، شرایط ثابت و زمان نگهداری نمونه بستگی دارد. زمان ثابت ترجیحاً در عرض 8 تا 24 ساعت است. اگر زمان ثابت نمونه بیش از 24 ساعت باشد یا زمان نگهداری آن بیش از 1 سال باشد، DNA بیش از حد تکه تکه می شود و باند هدف قابل تکثیر نیست.

3. نمونه ها باید قبل از جاسازی کاملاً آبگیری شوند تا از تأثیر فرمالین باقیمانده بر آزمایش های بعدی جلوگیری شود.

4. هنگام نمونه برداری از بافت جاسازی شده باید پارافین اضافی را حذف کرده و نمونه را تا حد امکان برش دهیم و مقدار نمونه برداری نباید از 30 میلی گرم بیشتر باشد، در غیر این صورت به راحتی می توان لیز ناکافی ایجاد کرد و بر بازده اسید نوکلئیک تأثیر گذاشت.

5. زمانی که از DNA ژنومی استخراج شده به عنوان الگو برای تکثیر PCR استفاده می شود، پیشنهاد می شود ابتدا آزمایش گرادیان الگو انجام شود و بهترین غلظت الگو برای تکثیر انتخاب شود.

6. لطفاً هنگام عمل از کت آزمایشگاه و دستکش یکبار مصرف استفاده کنید.

 

فقط برای استفاده تحقیقاتی!

 

 

تگ های محبوب: کیت استخراج DNA ژنومی ffpe، تولید کنندگان، تامین کنندگان، کارخانه کیت استخراج DNA ژنومی ffpe چین