کیت استخراج DNA ژنومیک باکتری MagBind

 

نام محصول	گربه خیر	مشخصات
کیت استخراج DNA ژنومیک باکتری MagBind	G3603-50T	50 T

 

 

کیت استخراج DNA ژنومیک باکتری MagBind می تواند به سرعت DNA ژنومی باکتری را از طریق سیستم بافر لیز باکتریایی بهینه سازی شده آزاد کند. ترکیب با دانه‌های مغناطیسی سوپرپارامغناطیسی که به‌ویژه برای استخراج اسید نوکلئیک توسط شرکت ما ساخته شده‌اند، DNA ژنومی موجود در لیز به طور انتخابی تحت اثر محلول اتصال جذب می‌شود و مقدار کمی ناخالصی جذب شده توسط دانه‌های مغناطیسی از طریق آن حذف می‌شود. تمیز کردن محلول شستشو، و DNA ژنومی جذب شده تحت عمل محلول شستشو آزاد می شود. این کیت برای انواع باکتری های گرم منفی و اکثر باکتری های گرم مثبت مناسب است. DNA ژنومی با خلوص و یکپارچگی بالا به‌دست‌آمده می‌تواند مستقیماً برای تقویت بعدی PCR، هیبریداسیون جنوبی، آماده‌سازی کتابخانه و سایر آزمایش‌های زیست‌شناسی مولکولی استفاده شود.

 

 

لیزوزیم، پروتئیناز K و RNase A باید همراه با یخ مرطوب حمل شوند و در درجه -20 نگهداری شوند. سایر معرف ها حمل شده و در دمای اتاق تا 12 ماه نگهداری می شوند.

 

 

شماره کامپوننت	جزء	G3603-50T
G3603-1	لیزوزیم	1 میلی لیتر
G3603-2	بافر لیزوزیم	7 میلی لیتر
G3603-3	بافر MB1	12 میلی لیتر
G3603-4	بافر MB2	12 میلی لیتر
G3603-5	پروتئیناز K	1 میلی لیتر
G3603-6	RNase A	500 UL
G3603-7	SweMag مهره ها	1 میلی لیتر
G3603-8	بافر MBP	12 میلی لیتر (18 میلی لیتر اتانول بی آب قبل از استفاده اضافه شده است)
G3603-9	بافر PW	24 میلی لیتر (56 میلی لیتر اتانول بی آب قبل از استفاده اضافه شده است)
G3603-10	بافر TE	10 میلی لیتر
دستی		یک کپی

 

 

1. اگر بافر MB1 بارندگی داشت، لطفاً آن را با حرارت دادن در 65 درجه حل کنید و پس از بازگشت به دمای اتاق از آن استفاده کنید.

2. قبل از استفاده 18 میلی لیتر اتانول بی آب به بافر MBP و 56 میلی لیتر اتانول بی آب به بافر PW اضافه کنید.

3. پایه های مغناطیسی مورد نیاز است اما در این کیت عرضه نمی شود.

 

 

1. 1-5 میلی لیتر از کشت تازه باکتریایی یک شبه را با سرعت 12،{3}} دور در دقیقه به مدت 1 دقیقه سانتریفیوژ کرده و مایع رویی را دور بریزید.

نکته: برای باکتری های گرم مثبت، محلول لیزوزیم باید اضافه شود تا پس از جمع آوری موجودات، دیواره سلولی بشکند. روش خاص به شرح زیر است: 130 میکرولیتر لیزوزیم بافر، 20 میکرولیتر لیزوزیم اضافه کنید، ورتکس کنید و تکان دهید تا باکتری ها کاملاً معلق شوند، حمام آب در دمای 37 درجه به مدت 60 دقیقه، هر 10 دقیقه با وارونگی مخلوط کنید.

2. 200 میکرولیتر بافر MB1 را به لوله سانتریفیوژ اضافه کنید و با گرداب زدن مخلوط کنید.

3. 20 میکرولیتر پروتئیناز K و 10 میکرولیتر RNase A را به لوله سانتریفیوژ اضافه کنید، با پیپت کردن یا گرداب زدن خوب مخلوط کنید و سپس در دمای 56 درجه به مدت 20 دقیقه انکوبه کنید، در این زمان محلول شفاف به نظر می رسد (اگر محلول شفاف نباشد. در این مرحله زمان انکوباسیون را به 30 دقیقه افزایش دهید و هر 10 دقیقه یک بار مخلوط کنید.

4. 200 میکرولیتر بافر MB2 و 200 میکرولیتر اتانول مطلق را به لوله سانتریفیوژ اضافه کنید و آن را وارونه و پایین مخلوط کنید، در این مرحله ممکن است یک رسوب لخته ظاهر شود.

5. 20 میکرولیتر سوسپانسیون SweMag Beads را به لوله سانتریفیوژ اضافه کنید (قبل از استفاده، SweMag Beads باید کاملاً معلق شده و به طور مساوی توزیع شود)، با پیپت باد کنید تا دانه های مغناطیسی به طور یکنواخت توزیع شوند.

6. به دانه های مغناطیسی اجازه داده شد تا به مدت 10 دقیقه در دمای اتاق باقی بمانند و در طول فرآیند، دانه های مغناطیسی چندین بار با استفاده از یک پیپت دمیده و مخلوط شدند تا دانه های مغناطیسی در حالت تعلیق قرار گیرند.

7. لوله را روی پایه مغناطیسی قرار دهید و به مدت 30 ثانیه بایستید. وقتی مایع رویی شفاف شد، مایع رویی را آسپیره کرده و دور بریزید.

8. 500 میکرولیتر Buffer MBP اضافه کنید، پایه مغناطیسی را بردارید، به آرامی بالا و پایین پیپت کنید تا دانه های مغناطیسی به خوبی پراکنده شوند. لوله را به مدت 30 ثانیه روی پایه مغناطیسی قرار دهید. وقتی مایع رویی شفاف شد، مایع رویی شفاف را آسپیره کرده و دور بریزید.

9. 600 میکرولیتر Buffer PW اضافه کنید، پایه مغناطیسی را بردارید، به آرامی بالا و پایین پیپت کنید تا دانه های مغناطیسی به خوبی پراکنده شوند. لوله را به مدت 30 ثانیه روی پایه مغناطیسی قرار دهید. وقتی مایع رویی شفاف شد، مایع رویی شفاف را آسپیره کرده و دور بریزید.

10. مرحله 9 را تکرار کنید.

11. درب لوله سانتریفیوژ را باز کنید، آن را به مدت 5-10 دقیقه در دمای اتاق بگذارید تا از تبخیر کامل اتانول باقیمانده اطمینان حاصل کنید. (اجازه ندهید خشک شوند تا بر عملکرد اسید نوکلئیک تأثیر نگذارند)

12. پایه مغناطیسی را بردارید، 50-100 میکرولیتر بافر TE یا آب بدون هسته اضافه کنید و به آرامی بالا و پایین بریزید تا دانه های مغناطیسی دوباره معلق شوند، به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق بمانید.

13. لوله را روی پایه مغناطیسی قرار دهید تا دانه های مغناطیسی کاملاً جذب شوند، سپس مایع رویی را در یک لوله سانتریفیوژ جدید بدون نوکلئاز آسپیره کنید تا DNA ژنومی با خلوص بالا به دست آید.

 

 

1. حتما این دفترچه راهنمای محصول را قبل از بهره برداری به دقت بخوانید.

2. برای اطمینان از بازده و یکپارچگی DNA ژنومی بدست آمده از استخراج باید تا حد امکان از ارگانیسم های تازه استفاده شود.

3. مقدار شروع باکتریوفاژ استخراج شده هرگز نباید بیش از حد باشد و باید به اندازه کافی لیز شود، در غیر این صورت ممکن است عملکرد و خلوص DNA ژنومی تحت تأثیر قرار گیرد.

4. سوسپانسیون های مهره های مغناطیسی باید برای جلوگیری از یخ زدگی نگهداری شوند.

5. دانه های مغناطیسی به راحتی ته نشین می شوند و باید قبل از استفاده خوب تکان داده شوند تا در حالت تعلیق یکنواخت قرار گیرند.

6. قبل از افزودن دانه های مغناطیسی، سایر معرف ها باید به خوبی مخلوط شوند.

7. مهره های مغناطیسی را برای مدت طولانی خشک نکنید زیرا ممکن است بر راندمان شستشوی DNA تأثیر بگذارد.

 

فقط برای استفاده تحقیقاتی!

 

 

تگ های محبوب: کیت استخراج DNA ژنومی باکتری magbind، تولید کنندگان، تامین کنندگان، کارخانه کیت استخراج DNA ژنومی باکتری magbind چین