معرفی محصول

نام محصول	گربه خیر	مشخصات
کوماسی درخشان آبی G250	G٪7b٪7b0٪7d٪7dML	250 میلی لیتر

توضیحات محصول/معرفی

Coomassie Brilliant Blue G250 می تواند پروتئین ها را به سرعت متصل کند. حداکثر جذب Coomassie Brilliant Blue G250 در حالت آزاد 488 نانومتر است. پس از اتصال به پروتئین، حداکثر جذب به 595 نانومتر تغییر یافت. مقدار جذب نوری متناسب با محتوای پروتئین است، بنابراین می توان از آن برای تشخیص کمی پروتئین استفاده کرد. این محصول همچنین می تواند به عنوان مکمل کیت تشخیص کمی پروتئین G2001 Bradford Assay استفاده شود.

شرایط نگهداری و حمل و نقل

حمل و نگهداری در دمای اتاق با اعتبار 12 ماه.

پروتکل/روندهای سنجش

1. (اختیاری) رسم منحنی استاندارد (روش میکروپلیت خوان): BSA را در آب حل کنید تا محلول کاری استاندارد پروتئین 5.5 mg/ml {{1} تهیه شود. محلول کاری استاندارد پروتئین در سطوح 0، 1، 2، 4، 8، 12، 16، 20 میکرولیتر به 96-صفحه چاه اضافه می‌شود و سپس گرادیان کار می‌کند. محلول تا 20 میکرولیتر با PBS یا سالین تکمیل می شود. منحنی گرادیان غلظت پروتئین 0، 25، 50، 100، 200، 300، 400 و 500 میکروگرم بر میلی لیتر است. اگر فقط مقایسه های کمی نسبی انجام شود، هیچ منحنی استانداردی لازم نیست.

2. نمونه مورد آزمایش را آماده کنید: نمونه پروتئین مورد آزمایش به طور مناسب رقیق می شود (غلظت پروتئین نمونه را می توان با آزمایش قبلی تشخیص داد که در محدوده منحنی استاندارد قرار دارد تا از قابلیت اطمینان نتیجه آزمایش اطمینان حاصل شود. ) و 20 میکرولیتر از هر نمونه به صفحه چاه 96- اضافه می شود. نمونه مورد آزمایش باید در همان محلول استاندارد پروتئین رقیق شود.

3. تشخیص: 200 میکرولیتر محلول Coomassie برلیانت آبی G250 به هر چاهک اضافه می‌شود و کاملاً مخلوط می‌شود (96-صفحه چاه را می‌توان به مدت 30 ثانیه روی نوسانگر قرار داد). پس از 3-5 دقیقه در دمای اتاق، منحنی استاندارد شماره 0 به عنوان مرجع استفاده می شود و اندازه گیری رنگ سنجی در طول موج 595 نانومتر انجام می شود و مقدار جذب هر چاه ثبت می شود.

4. محاسبه: مقدار پروتئین گرادیان (ug/mL) در منحنی استاندارد به عنوان آبسیسا و مقدار جذب نور به عنوان اردیت برای رسم منحنی استاندارد در نظر گرفته می شود. با توجه به مقدار جذب نمونه، غلظت پروتئین نمونه اندازه گیری شده در چاه مربوطه را می توان بر روی منحنی استاندارد (ug/mL) یافت و سپس در رقت نمونه ضرب می شود، غلظت پروتئین واقعی نمونه ای که باید اندازه گیری شود

5. علاوه بر این: اگر از اسپکتروفتومتر برای تعیین استفاده شود، از لوله آزمایش شیشه ای یا لوله رنگ سنجی شیشه ای به عنوان ظرف واکنش برای ایجاد منحنی های استاندارد استفاده می شود. پس از رقیق شدن مناسب نمونه پروتئین مورد آزمایش، آن را به یک لوله آزمایش شیشه ای یا لوله رنگ سنجی جدید با حجم نمونه 1 میلی لیتر اضافه کنید. 3 میلی لیتر محلول آبی درخشان G250 Coomassie را به لوله گرادیان منحنی استاندارد و لوله نمونه اضافه کنید، کاملاً مخلوط کنید، به مدت 3-5 دقیقه در دمای اتاق قرار دهید، سپس از اسپکتروفتومتر برای تشخیص رنگ سنجی استفاده کنید.

6. تشخیص: طول موج اسپکتروفتومتر روی 595 نانومتر تنظیم شده و منحنی استاندارد و نمونه مورد آزمایش با لوله منحنی استاندارد شماره 0 به عنوان مرجع صفر می شوند. منحنی های استاندارد همانطور که در مرحله 4 توضیح داده شده ترسیم می شوند و غلظت پروتئین در نمونه های مورد آزمایش محاسبه می شود.