کیت تشخیص مایکوپلاسما (PCR)

آلودگی مایکوپلاسما اثرات نامطلوبی بر تمام جنبه های سلولی ایجاد می کند و به یک مشکل بسیار ارزشمند در کشت سلول تبدیل شده است. بنابراین، تشخیص منظم آلودگی مایکوپلاسما بسیار ضروری است. این کیت تشخیص مایکوپلاسما از روش PCR برای تشخیص آلودگی به مایکوپلاسما در مواد بیولوژیکی سلولی مختلف (مانند کشت سلولی، ترشحات حیوانات آزمایشگاهی، سرم حیوانی و غیره) استفاده می‌کند. پرایمرهای مخلوط مورد استفاده در کیت پرایمرهای خاصی هستند که برای ناحیه حفاظت شده توالی 16S rRNA مایکوپلاسما طراحی شده اند. تکثیر اختصاصی PCR DNA مایکوپلاسما را می توان در عرض یک ساعت با مخلوط Mycoplasma PCR (2×) با استفاده از محلول کشت سلولی به عنوان الگوی PCR تکمیل کرد. این کیت حساسیت بالایی دارد و می تواند تا 20 کپی از مایکوپلاسما را شناسایی کند.

کشتی با یخ مرطوب؛ ذخیره شده در درجه -20، اعتبار برای 12 ماه.

1. نمونه را آماده کنید: مقدار مناسبی از مایع رویی کشت سلولی برای آزمایش در یک لوله PCR تمیز گرفته شد. این لوله های PCR در دمای 95 درجه به مدت 5 دقیقه در دستگاه PCR تحت عملیات حرارتی قرار گرفت و از آن به عنوان الگو استفاده شد. نمونه‌های سرم را می‌توان با آب بدون مایکوپلاسما رقیق کرد و نمونه‌های مناسب را در یک لوله PCR تمیز قرار داد. این لوله های PCR در دمای 95 درجه به مدت 5 دقیقه در دستگاه PCR تحت عملیات حرارتی قرار گرفت و از آن به عنوان الگو استفاده شد. ;

2. واکنش های PCR را آماده کنید: کنترل منفی (1 میکرولیتر نمونه را با همان مقدار آب بدون مایکوپلاسما جایگزین کنید) و کنترل مثبت (0) را اضافه کنید. 5 میکرولیتر کنترل مثبت به 1 میکرولیتر نمونه به عنوان الگو) باید تنظیم شود. هر آزمایش در طول آزمایش از ماسک و دستکش یکبار مصرف استفاده کنید و با احتیاط عمل کنید تا از ورود نادرست آلودگی مایکوپلاسما اگزوژن جلوگیری کنید.

3. راه اندازی برنامه PCR:

4. الکتروفورز ژل: 10 میکرولیتر محصول PCR را بردارید و از ژل آگارز 1% برای تشخیص الکتروفورز استفاده کنید.

5. تجزیه و تحلیل نتایج: در هر آزمایش آلودگی مایکوپلاسمایی نمونه ها با مقایسه با نتایج کنترل منفی و کنترل مثبت انجام شد. اندازه باند مثبت حدود 500 جفت باز بود. اگر باندهایی در نتایج آزمایش کنترل منفی وجود داشته باشد، احتمالاً آلودگی در سیستم PCR وجود دارد و پیشنهاد می‌شود دوباره نتایج تأیید شود. در صورت لزوم، محصولات PCR را نیز می توان به طور معمول برای شناسایی گونه های خاص مایکوپلاسما تعیین توالی کرد.

1. این کیت می تواند M. orale,M را تشخیص دهد. آرژنینی، ام. بوویس، ام. fermentans، M. گالی سپتیکوم، ام. هومینیس، ام. pirum، اوره پلاسما spp، M. هیورینیس، ام. پنومونیه، A. laidlawii و حداقل 11 نوع آلودگی مایکوپلاسما.

2. همه معرف ها باید قبل از استفاده ذوب شده و کاملاً روی یخ مخلوط شوند و پس از استفاده در دمای -20 درجه نگهداری شوند.

3. کنترل های منفی و کنترل های مثبت باید برای هر آزمایش تنظیم شوند و گروه آزمایش تنظیم گرادیان های الگوی نمونه را توصیه می کند.

4. در حین عمل باید از ماسک استفاده شود و استانداردهای عملیات PCR باید به شدت رعایت شود تا از ورود آلودگی های اگزوژن بر نتایج تجربی جلوگیری شود.

5. به منظور اطمینان از قابلیت اطمینان و پایداری آزمایشات سلولی، توصیه می شود که آلودگی مایکوپلاسما به طور مرتب تشخیص داده شود.

6. برای ایمنی و سلامتی خود، لطفا از کت آزمایشگاه و دستکش یکبار مصرف استفاده کنید.

فقط برای استفاده تحقیقاتی!

تگ های محبوب: کیت تشخیص مایکوپلاسما (pcr)، کیت تشخیص مایکوپلاسما چین (pcr) تولید کنندگان، تامین کنندگان، کارخانه