MitoTracker Red CMXRos

 

نام محصول	گربه خیر	مشخصات
Mito ردیاب قرمز CMXRos	G٪7b٪7b0٪7d٪7dUG	50 گرم

 

 

MitoTracker Red CMXRos (کاوشگر فلورسنت قرمز میتوکندری) یک مشتق از ایکس روزامین با وزن مولکولی 531.52، طول موج تحریک 3 ± 578 نانومتر و طول موج انتشار 4 ± 599 نانومتر است. این رنگ می تواند مستقیماً وارد سلول های زنده شده و روی میتوکندری قرار گیرد و قادر است به صورت کووالانسی به میتوکندری متصل شود. اصل برچسب گذاری خاص میتوکندری این است که اسکلت کاوشگر با بار مثبت می تواند روی میتوکندری های دارای بار منفی قرار گیرد و گروه کلرومتیل روی کاوشگر می تواند به صورت کووالانسی به گروه سولفیدریل آزاد در میتوکندری متصل شود که نقش برچسب زدن فلورسنت را ایفا می کند. ; میتوکندری‌های سلولی را می‌توان به سادگی با انکوبه کردن آنها با سلول‌های زنده برای مدت معینی برچسب‌گذاری کرد و پس از برچسب‌گذاری میتوکندری‌ها، میتوکندری‌ها را می‌توان از طریق تثبیت و سوراخ کردن پردازش کرد، که می‌تواند برای آزمایش‌های چند برچسب‌گذاری بعدی استفاده شود. .

 

 

کشتی با یخ مرطوب؛ در -20 درجه دور از نور، اعتبار به مدت 12 ماه نگهداری شود.

 

 

جزء	G٪7b٪7b0٪7d٪7dUG
Mito ردیاب قرمز CMXRos	50 گرم
دستی	1 عدد

 

 

1. آماده سازی محلول کاری سنجش:

1.1. این محصول به صورت پودر خشک می باشد که برای اطمینان از ته نشین شدن آن در ته تیوب باید قبل از استفاده مدت کوتاهی با سرعت بالا سانتریفیوژ شود. DMSO درجه سلولی خود را ارائه دهید.

1.2. تهیه محلول نگهداری: 94 میکرولیتر DMSO (سطح سلول) را به لوله اضافه کنید، باد کرده و خوب مخلوط کنید تا رنگ کاملاً حل شود، یعنی محلول ذخیره سازی رنگ فلورسنت میتوکندری با غلظت 1 میلی مولار (اطلاعات وزن مولکولی روی برچسب محصول) به دست می آید، و سپس برای جلوگیری از از دست رفتن معرف های آویزان شده روی دیوار، به طور خلاصه با سرعت بالا سانتریفیوژ کنید. محلول ذخیره سازی را در درجه -20 ذخیره کنید. توصیه می شود آن را در اندازه های کوچکتر نگهداری کنید و از انجماد و ذوب مکرر خودداری کنید.

1.3. تهیه محلول آزمایشی: اگر سنجش مستقیماً پس از رنگ‌آمیزی انجام شود، محلول ذخیره‌سازی را در محلول کاری سنجش میتوکندری با غلظت نهایی 0 رقیق کنید.{3}}.25 میکرومولار با بافر بیولوژیکی (Hanks, PBS) ) یا محیط پایه بدون سرم؛ اگر پس از رنگ‌آمیزی به عملیات‌های بعدی مانند تثبیت و سوراخ کردن نیاز است، محلول ذخیره‌سازی را در محلول کاری سنجش میتوکندری با غلظت نهایی 0 رقیق کنید.4-0}.6 میکرومولار با بافر بیولوژیکی (Hanks، PBS) یا محیط پایه بدون سرم؛

2. رنگ آمیزی سلول (پروتکل زیر برای سلول های چسبنده است؛ سانتریفیوژ برای تبادل سلول های معلق لازم است)

2.1. سلول ها روی صفحات کشت سلولی یا صفحات سلولی صعود می کنند تا زمانی که تا حد معینی همگرا شوند.

2.2. محیط کشت سلولی برداشته می شود و هر بار 1-2 بار با بافر از قبل گرم شده به مدت 3-5 دقیقه شسته می شود.

2.3. محلول کار از قبل گرم شده را برای تشخیص میتوکندری اضافه کنید و در دمای 37 درجه به مدت 30 دقیقه در انکوباتور کشت سلولی انکوبه کنید (به دلیل انواع و حالات مختلف سلول، زمان انکوباسیون را می توان تا حدودی تنظیم کرد).

2.4. محلول انکوباسیون را بردارید و هر بار 2-3 بار به مدت 3-5 دقیقه با محلول بافر بشویید.

2.5. به طور مستقیم یا با یک محیط نصب ضد محو شدن (توصیه شده G1401) فیلم ها مهر و موم شده و زیر یک میکروسکوپ فلورسانس (Ex{4}} nm، Em=599 nm) مشاهده می شوند.

3. تثبیت و سوراخ کردن سلول و سایر دستکاری ها (اختیاری):

توجه: پس از رنگ آمیزی، این محصول قابل تثبیت و سوراخ شدن است، اما سیگنال فلورسنت پس از تثبیت ضعیف می شود.

3.1. تثبیت سلولی

3.1.1. سلول‌های تیمار شده با رنگ‌آمیزی و شستشو با رنگ فلورسنت میتوکندری به فیکساتور (توصیه‌شده G1101) اضافه می‌شوند و به مدت 10 دقیقه در دمای اتاق ثابت می‌شوند.

3.1.2. فیکساتور را بردارید و هر بار 2-3 بار به مدت 3-5 دقیقه با بافر بشویید.

3.2. سوراخ شدن سلول

3.2.1. سلول های ثابت و شسته شده با 0 اضافه می شوند.2-0.5% Triton X-100 و به مدت 10 دقیقه در دمای اتاق سوراخ می شوند.

3.2.2. مایع سوراخ‌کننده برداشته می‌شود و هر بار 2-3 بار به مدت 3-5 دقیقه با محلول بافر شسته می‌شود.

3.3. سلول ها رنگ آمیزی می شوند و سپس برای پردازش ثابت و سوراخ می شوند و می توان از آنها برای آزمایش های بعدی مانند چند برچسب گذاری استفاده کرد.

 

 

1. با توجه به انواع و حالت های مختلف سلول ها، غلظت کار رنگ و زمان انکوباسیون را می توان به طور مناسب تنظیم کرد.

2. رنگ برای محلی سازی میتوکندری در حالت سلول های زنده نیاز به استفاده دارد و سلول ها را نمی توان ابتدا ثابت کرد، در غیر این صورت منجر به نتایج مثبت کاذب محلی سازی نادرست خواهد شد. تثبیت و عملیات های بعدی را می توان پس از رنگ آمیزی سلول های زنده انجام داد.

3. هنگام رنگ آمیزی و شستشوی سلول های زنده، محلول کار سنجش و بافر شستشو باید از قبل در دمای 37 درجه گرم شوند. رنگ‌آمیزی و شستشو با انکوباسیون در انکوباتور انجام می‌شود تا بر مورفولوژی سلول‌ها با تحریک اختلاف دما تأثیری نگذارد.

4. برای جلوگیری از خاموش شدن فلورسانس، کل فرآیند رنگ‌آمیزی باید به دور از نور انجام شود.

5. مخلوط های پروب اصلی باید در ظروف جداگانه نگهداری شوند تا از انجماد و ذوب مکرر جلوگیری شود. برای جلوگیری از ضایعات، محلول رنگ آمیزی در صورت نیاز آماده می شود.

6. برای سلامت و ایمنی خود، لطفاً در حین کار از کت و دستکش آزمایشگاهی استفاده کنید.

 

فقط برای استفاده تحقیقاتی!

 

 

تگ های محبوب: mitotracker قرمز cmxros، چین mitotracker قرمز cmxros تولید کنندگان، تامین کنندگان، کارخانه