محیط جداسازی لنفوسیت (انسان)

این محصول یک محلول جداسازی با چگالی گرادیان مناسب برای جداسازی لنفوسیت های خون محیطی انسان و اکثر سلول های تک هسته ای پستانداران است. اصل آن عمدتاً بر اساس تفاوت تراکم بین سلول های مختلف در خون محیطی است (تراکم گلبول های قرمز و گرانولوسیت ها حدود 1 است.{10}}90 گرم در میلی لیتر؛ پلاکت ها 1.{3}}. 035 گرم است. /ml لنفوسیت ها و مونوسیت ها 1 است.075-1.090 گرم در میلی لیتر)، لنفوسیت ها از خون محیطی جدا می شوند. سانتریفیوژ با چگالی گرادیان این محصول یک محلول جداسازی استریل با سطح اندوتوکسین کم با چگالی 0.001 ± 1.077 گرم در میلی لیتر (20 درجه) است. این محصول بر اساس دیاتریزوات مگلومین فیکول سنتی بهینه شده است تا پایداری محلول جداسازی را برای مدت طولانی پس از افزودن نمونه خون حفظ کند و استفاده از آن را آسان کرده و خلوص و شرایط لنفوسیت های جدا شده را فراهم می کند.

کشتی با یخ مرطوب؛ ذخیره در 2-8 درجه، محافظت در برابر نور. 12 ماه اعتبار دارد

برای جداسازی 1 میلی لیتر لنفوسیت از خون محیطی انسان، نسبت حجمی خون به محیط جداسازی لنفوسیت 1:1-1:2 است، با تنظیمات مناسب در این محدوده. هنگام انتخاب لوله سانتریفیوژ باید دقت شود که حجم کل خون و محیط جداسازی لنفوسیت از دو سوم حجم لوله تجاوز نکند.

1. 1 میلی لیتر خون کامل ضد انعقاد تازه (هپارین، EDTA، سیترات سدیم و سایر ضد انعقادها را می توان استفاده کرد)، با حجم مساوی PBS (توصیه G4202) رقیق کنید یا بافر هنکس (g4203 توصیه شده) حاوی کلسیم و منیزیم نیست. 2 میلی لیتر خون کامل رقیق شده.

2. 3 میلی لیتر از محلول جداسازی لنفوسیت خون محیطی انسان را به لوله سانتریفیوژ استریل 15 میلی لیتری پیپت کنید (EP-1500-J توصیه می شود).

3. لوله سانتریفیوژ را در 45 درجه کج کنید و به آرامی 2 میلی لیتر خون رقیق شده را در امتداد دیواره لوله به لوله سانتریفیوژ اضافه کنید، به طوری که خون صاف روی لایه بالایی محیط جداسازی لنفوسیت خون محیطی انسان قرار گیرد.

4. توصیه می شود از سانتریفیوژ سر افقی استفاده کنید، لوله را در آداپتور هد افقی قرار دهید، سرعت سانتریفیوژ را کاهش دهید ({1}} سرعت مناسب است) و سانتریفیوژ را با 800 xg به مدت 25 دقیقه در دمای اتاق انجام دهید.

5. پس از سانتریفیوژ، لوله به آرامی روی یک قفسه لوله نگه داشته می شود و یک طبقه بندی واضح مشاهده می شود: بالاترین لایه لایه پلاسما است. لایه میانی بالایی لایه لنفوسیتی است. لایه میانی پایین لایه محیط جداسازی لنفوسیت است. و پایین ترین لایه لایه اریتروسیت و گرانولوسیت است (به شکل پیوست مراجعه کنید).

6. بالاترین لایه پلاسما را بردارید و لایه tunica albuginea (لایه لنفوسیتی) را با دقت داخل یک لوله سانتریفیوژ استریل جدید بکشید.

7. با 8 میلی لیتر PBS (توصیه شده G4202) یا بافر دیگر بشویید، در 100 xg به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ کنید، سپس مایع رویی را دور بریزید.

8. مرحله 7 (اختیاری) را تکرار کنید.

9. تعلیق مجدد لنفوسیت ها در محیط یا بافر مورد نیاز با توجه به هدف آزمایش.

1. محصول باید قبل از استفاده کاملاً متعادل شده و در دمای اتاق به صورت وارونه مخلوط شود. دمای مناسب برای جداسازی 18-25 درجه است.

2. برای حفظ فعالیت لنفوسیت ها، بهتر است خون تازه ضد انعقاد را ظرف 2 ساعت پس از جمع آوری خون انتخاب کنید. در صورت نیاز به کشت و آزمایش بیشتر لنفوسیت های جدا شده، لطفاً در هنگام جمع آوری و جداسازی خون به عمل آسپتیک توجه کنید.

3. رقیق کردن یا شستن بافر، از بافر حاوی یون های کلسیم و منیزیم استفاده نکنید تا از تجمع سلول های خونی جلوگیری شود.

4. جذب بیش از حد اجزای خارج از لایه tunica albuginea لنفوسیت ها باعث می شود که برخی از گرانولوسیت ها یا پلاکت ها در محل اتصال مخلوط شوند.

5. تفاوت بین نمونه های خون ممکن است بر نتایج جداسازی تأثیر بگذارد. نیروی گریز از مرکز و زمان را می توان به طور مناسب با توجه به وضعیت واقعی تنظیم کرد. نیروی گریز از مرکز مرجع و محدوده زمانی 500-1000 xg و 20-30 دقیقه است.

6. ته نشین شدن گلبول های قرمز پس از مخلوط شدن خون و محیط جداسازی لنفوسیت برای مدت معینی طبیعی است.

7. برای ایمنی و سلامت خود، لطفا از عینک ایمنی، دستکش یا لباس محافظ استفاده کنید.

پیوست: نمودار شماتیک هر لایه قبل و بعد از جداسازی

این محصول فقط برای اهداف تحقیقاتی علمی است نه برای تشخیص بالینی!

تگ های محبوب: محیط جداسازی لنفوسیت (انسان)، تولید کنندگان، تامین کنندگان، محیط های جداسازی لنفوسیت چین (انسانی)